Световая микроскопия сверхвысокого разрешения получает третье измерениее

29 июня 2010

Исследователям из Медицинского института Говарда Хьюза (США) удалось значительно усовершенствовать один из ведущих методов световой микроскопии, который позволяет определять положение флуоресцентных белков в клетках с точностью до 10–20 нм. Адаптировав принципы интерферометрии к существующей технологии, ученые смогли получить «трехмерные» изображения клеточных структур, не потеряв при этом в разрешении.

Изображение клетки с введенными в нее флуоресцентными белками. Глубина расположения молекул определяется цветом: красный соответствует самым нижним слоям, фиолетовый — наиболее приближенным к наблюдателю (изображение получено Харальдом Хессом).

«Мы создали прекрасный инструмент для наблюдения за процессами, происходящими на клеточном уровне», — уверенно заявляет Харальд Хесс (Harald Hess), возглавивший разработку микроскопов нового типа. Придуманная учеными методика получила название iPALM (interferometric photoactivated localization microscopy, интерферометрическая светочувствительная локализационная микроскопия); основой для ее реализации послужила технология PALM, предложенная г-ном Хессом и его коллегой Эриком Бетцигом (Eric Betzig) в 2005 году.

Суть метода PALM состоит в том, что введенные в клетку флуоресцентные метки активируются (и деактивируются) постепенно, с помощью световых импульсов: на каждом из снимаемых изображений «включается» лишь малая их часть. При объединении нескольких тысяч таких изображений создается цельная иллюстрация всей исследуемой структуры, на которой отдельно отмечен каждый флуоресцентный белок. В результате ученые получают гораздо более четкую картину, чем в случае применения методов традиционной флуоресцентной микроскопии.

Совершенствованием методики PALM занимались оба ее изобретателя: Эрик Бетциг пытался приспособить технологию для исследования живых клеток и флуоресцентных белков разного цвета свечения, а Харальд Хесс собирался обеспечить получаемым изображениям дополнительное, третье, измерение. Довольно быстро г-н Хесс пришел к выводу о том, что лучшим способом определения глубины расположения белка в образце будет интерферометрия, и уже в сентябре 2006 года он предложил идею iPALM. «Интерферометрия — один из самых точных методов измерения, — объясняет ученый. — Если у вас есть источники света достаточной яркости, появляется возможность измерять сверхмалые величины».

На прежнем месте работы (Харальд Хесс перешел в Медицинский институт Говарда Хьюза всего около двух лет назад) исследователю приходилось использовать интерферометрические методы для поиска неровностей на поверхности пластин жесткого диска. Измерения проводились следующим образом: световая волна посылалась в сторону изучаемой поверхности, отражалась от нее и сравнивалась с «эталонной», отраженной от зеркала, которое устанавливалось на известном удалении от источника. При обнаружении малейшего отличия расстояния между пластиной и источником от заданного приемник фиксировал смещение фаз отраженных волн друг относительно друга. По измеренному значению амплитуды суммарной волны (в идеале оно должно быть нулевым) определялась высота неровности с точностью до нанометров.

Основная сложность применения указанной технологии для изучения биологических образцов состоит в том, что свет испускается не лазером, а флуоресцентными молекулами, находящимися внутри исследуемого объекта. Проблема получения «эталонной» волны была решена методом расщепления фотонов; каждый квант света, таким образом, служил образцом для самого себя. С помощью стандартного PALM-микроскопа частицы собирались с обеих сторон пробы, а затем два световых пучка посылались на светоделительный элемент, который расщеплял их и направлял к трем отдельным камерам. По результатам измерения интенсивности пучков, попавших в каждую из камер, делался вывод о глубине расположения метки в пробе.

«Для функционирования iPALM достаточно небольшого количества фотонов, а это весьма важно с практической точки зрения, — выделяет сильные стороны изобретения Харальд Хесс. — Наша технология практически в сто раз превосходит по эффективности конкурирующие методики [получения трехмерных изображений]».

Подготовлено по материалам PhysOrg.

 
Изобретатели

Дмитрий Иванович Менделеев

Менделеев Дмитрий Иванович – гениальный русский химик, физик и натуралист в широком смысле этого слова. Родители Менделеева – чисто русского происхождения. Дед его по отцу был священником и носил фамилию Соколов; фамилию "Менделеев" получил, по обычаям того времени, в виде прозвища, отец Менделеева в духовном училище. Мать Менделеева происходила из старинного, [...]

Джеральд Лоусон

9 апреля в Калифорнийском госпитале Маунтин-Вью закончил свои дни родоначальник игровой индустрии Джеральд Лоусон.
Он, без сомнения, стал одним из значительнейших людей в современной истории игропрома. Такие люди, как он, определили развитие этой индустрии. А ведь мало кто знает об этом инженере из Америки, создавшем первую игровую систему для работы с программируемыми картриджами.
Он родился [...]

Альберт Эйнштейн

Альберт Эйнштейн (14 марта 1879 год — 18 апреля 1955 год) – знаменитый физик, который положил в основу развитие современной физики. Родился ученый в Германии в небогатой семье в 1879 году. Подросток был замкнутый по характеру и глубоко верующим, в школе он не отличался ничем от остальных учеников. Но, когда Альберт познакомился с философскими произведениями [...]